动物模型及治疗分子

当前位置:首页恒峰娱乐g22手机登录 >

恒峰娱乐g22手机登录

动物模型及治疗分子

时间:2020-01-10本站浏览次数:82

       

动物模型及治疗分子

本发明揭示了产生嵌合人‑非人抗体及嵌合抗体链的方法,以及如此产生的抗体和抗体链,及其衍生物,包括完全人源化抗体;本发明还揭示了包含所述抗体、抗体链及衍生物的组合物,以及适用于所述方法中的细胞、非人哺乳动物和载体。

另一方面,产生转基因非人哺乳动物的方法包括通过同源重组逐步插入多个片段的方式将人VDJ或VJ区插入宿主非人哺乳动物恒定区上游,优选使用重复过程。插入来自人VDJ和VJ基因座的大约100kb的合适片段,在如本文所述最终的反复插入过程之后合适地形成部分或完整的VDJ或VJ区。

(b)位于全部或部分非人k恒定区上游的一或多个人Ig轻链kV区及一或多个人Ig轻链kJ区,

⑹缺失第二选择标记和第二载体部分,及

另一方面,本发明涉及细胞,如非人哺乳动物细胞,如ES细胞,其基因组包含:

本发明还涉及根据本文揭示的任何方法产生的人源化抗体及如此产生的人源化抗体在医药学中的应用。

⑹任选地,位于宿主非人哺乳动物K恒定区上游的一或多个人Ig轻链kV区及一或多个人Ig轻链区和/或位于宿主非人哺乳动物入恒定区上游的一或多个人Ig轻链入V区及一或多个人Ig轻链AJ区;

实施例2

可操纵连接合适地使得可产生包含所述人可变区的抗体重链或轻链。

动物模型及治疗分子

本发明揭示了产生嵌合人-非人抗体及嵌合抗体链的方法,如此产生的抗体和抗体链,以及包括完全人源化抗体的其衍生物,本发明揭示了包含所述抗体、抗体链及衍生物的组合物,以及适用于所述方法中的细胞、非人哺乳动物和载体。

(iii)核苷酸89,158,979-90,267,076,如核苷酸89,159,079-90,266,976。

-方面,形成嵌合抗体的宿主非人类哺乳动物恒定区可以在不同的(非内源)染色体基因座。在这种情况中,插入的人类DNA如人类可变VDJ或VJ区然后可被插入非人类基因组中,位于与天然发生的重链或轻链恒定区不同的位置。所述天然恒定区可以在与天然位置不同的染色体基因座插入基因组中或者在基因组中复制,由此其与人类可变区功能性排列,由此仍可产生本发明的嵌合抗体。

-方面,所述细胞或非人类哺乳动物包含完全的人类λ基因座(来自人类的AVJC区),嵌合的κ基因座(与宿主κ恒定区可操纵地连接的人类kVJ区)及嵌合的重链基因座,其具有与宿主重链恒定区可操纵地连接的人类VDJ区。

提及位于非人类哺乳动物恒定区上游的可变区的位置是指存在两个抗体部分可变区与恒定区的合适的相对位置,以使得所述可变区与恒定区在哺乳动物体内形成嵌合抗体或抗体链。因此,插入的人类DNA和宿主恒定区是彼此功能性排列的以产生抗体或抗体链。

-方面,转换序列既不是人类序列,也不是非人类哺乳动物中天然的,例如一方面,非人类哺乳动物转换序列不是小鼠或人类转换序列。所述转换序列可以是例如啮齿类动物或灵长类动物序列,或者是合成的序列。特别地,所述转换序列可以是大鼠序列,其中所述非人类哺乳动物是小鼠。例如,小鼠或人类恒定区mu序列可以置于来自大鼠或黑猩猩的转换序列或者其它转换序列的控制下,适当地能允许在体内发生同种型转换。

本发明的插入方法适当地提供如下一或多个结果:

本发明还涉及根据本文揭示的任何方法产生的人源化抗体及如此产生的人源化抗体在医药学中的应用。

在此阶段,将插入~200kb人类基因座。

GCGGCCGCAACCTGGGCAAATGGGAGCTTAGCAACAATGTAGGGGGCTGGACCTAGACTTCCTACACATGTGTAACAGATGTGCAGCTTGGTCTTCATGTGTGTATTACCCTAACATTTGGAGCAGGAGCTGTCTCTGACTCTGTTGCCTGCCATTGGATCCCCTTCCCCTGCTTGGGCTGCCTTGTTTGGCCTTAGTAGGAAAGGATGTGCTTAGTCCTGCTGTGACTTGATGTCCCTAGGCAGAATGATACCCCAGGGGGGCTCCCCATCTCTGAGGAGATGGGCAAAGGGTAATGGTTGGAGGGACTTGTGAGGCTGGGACTGGGAGGAGAGAAAGGAGACAGCTGTAACTGGAATGATGTTAAGTGAACAAATGAATGGATAGATTAGATAGACAGATAGACAGACAGACAGACAGACAGACAGACAGACAGACAGACAGACAGATAGAAAGATAGATAGATAAGGGGAAAAAGAAACGTAGCTGAGCAAGCCAGAGAGAGCAAGCCAAATAAGCAGCATTCCTCCATGACTTTTCCTTCAGCTCCTGCCTATGAGTCTGCCTTGACTTCCCTCAGTGATTGGTTGTAAGTTAAAAGGTGAAATAAACCCTTTCTTTGACAAGTTGCTTTTGGTTCTGATTTTTATCACAGCAAGAGAAAATCAAACTAGAACAAACATGTATTTTTCCTGGCACATGTCCATAGTAAGGCAGAAATGATCTTCAGACCTAGACCATAGATACTACAGAGAGCAGAAGTGTAGATAGGTGGACTTACTGTATGATTGTAATCCAAGTAAATCTACATAGCTAGAGAGCTAGAGGAAAGGCCAAAGCTTCCTCTGGGAGGTCAGATCCTGTCGCACTGTAGCCAATAAGGCATATTGCATCACAGGAAAGGACTAAGACCCAGGCTGGCAATAGTGTCTGTATCTTAACTAGATCTCTCTAGTGAGTGAGGAAGTAAATTTGTGAGAGCCCAGACTGTGGGCTCGGAAGGTACCTGCCATGCCCCTGTTAGTAACTGAGTACTACAGCAGGAGCAGGTGTTCTCTAGAAAGCCTGAGACAACTCTACTTCTTCTCTCAAGAGACCACCTAATACAGGCCTGAGAGAACAGACTCTGGAAATAGATGGGACTTACGGAGCTAAGATCTAGAGCTCATCTACAGAGCAGAATCCCAGCCAAGAGAACAAAGAATACTGACTCTCTCCTGTTCCCTACTCCTAGAGTTCTAAAACACACTATAGGGAAGGGAGCCTCTAGACCTCCGTCCATTCCCCATCTTGCTCATTCCATCTTCCCATGTCCCCAGGTCTCCAAGCCACAGACACCACCTTTCCTATTCACCCACCTTTCTGTGTCCCTAGGTCCCCAGGCCATAGTCACCTCCCCCCACACCCCGCTCACCCTGCCCCATCTATGCCCCTAGATGCTTACTTACCAGAGTCTTTTGTCTGACGTGGGGCTACAAGCATCTATGCTCCCTAAGCACCTACTGCTGACCTGTAGGACCCAGCTCTGAACCAACTCATATAAGTAAATACAGACTCTCCCCTGTCTTAGGATGGCCCCCTGGGTCAGGAGGAGACCACTGCCAAGGAACCTTCTCTTAGAGCACTGAACTCCTCCCCTGTACCACTTAGGACAGACCTGAGACCTATTATTACTGATTACCAGAGCTCTGGCAGTGACCACGGAGGAGATAGATCCACCCTGGACACAGGAAACACAGCACCAGAGATACTGCTTCATCACAACAGTAGAGTGACACTTTAGACTTTAATTTGGGTCACTTTCCTGCTGTAGAGGTGGGATCAGAAAGCAAAGAGCAGTATGAGTGCCTGATAGGCACCCAAGTACACTATAGAGTACTCATGGTGAATAAGGTACCTCCATGGCTTCCCAGGGAGGGGCACTGCCCCACCCCCACCATCACAGACCTTTCTCCATAGTTGATAACTCAGACACAAGTGAATGACAGATGGACCTCCATCTGCTCTTATTTTAAAAAGAAGACAAACCCCACAGGCTCGAGAACTTTAGCGACTGTTTTGAGAGAAATCATTGGTCCCTGACTCAAGAGATGACTGGCAGATTGGGGATCAGAATACCCATACTCTGTGGCTAGTGTGAGGTTTAAGCCTCAGAGTCCCTGTGGTCTCTGACTGGTGCAAGGTTTTGACTAAGCGGAGCACCACAGTGCTAACTGGGACCACGGTGACACGTGGCTCAACAAAAACCTTCTGTTTGGAGCTCTCCAGGGGCAGCCTGAGCTATGAGGAAGTAGAGAGGCTTGAGAAATCTGAGGAAGAAAAGAGTAGATCTGAGAGGAAAGGTAGCTTTCTGGAGGTCAGGAGACAGTGCAGAGAAGAACGAGTTACTGTGGACAGGTCTTAGATGGGGAAAGAATGAGCAAATGCAAGCATCAGAAGGGTGGATGCAATGTCCTGCCAAGGACTTACCAAGAGGATCCCCGGACAGAGCAGGCAGGTGGAGTTGACTGAGAGGACAGGATAGGTGCAGGTCCCTCTCTTGTTTCCTTTCTCCTTCTCCTGTTTCCTTCTTCTCTTGTCACAGGTCTCACTATGCTAGCCAAGGCTAGCCTGAAAGATTACCATCCTACAGATGGGCCCATCCAGTTGAATTAAGGTGGAGATCTCTCCAAACATCTGAGTTTCTGAGGCTTGGATGCCACTGGGGACGCCAAGGGACTTTGGGATGGGTTTGGTTGGCCCCAGATGAAGGGCTACTTCACTGGGTCTATAATTACTCTGATGTCTAGGACCAGGGGGCTCAGGTCACTCAGGTCAGGTGAGTCCTGCATCTGGGGACTGTGGGGTTCAGGTGGCCTAAGGCAGGATGTGGAGAGAGTTTTAGTATAGGAACAGAGGCAGAACAGAGACTGTGCTACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGGTAAGCTGGCTTTTTTCTTTCTGCACATTCCATTCTGAAACGGGAAAAGATATTCTCAGATCTCCCCATGTCAGGCCATCTGCCACACTCTGCATGCTGCAGAAGCTTTTCTGTAAGGATAGGGTCTTCACTCCCAGGAAAAGAGGCAGTCAGAGGCTAGCTGCCTGTGGAACAGTGACAATCATGGAAAATAGGCATTTACATTGTTAGGCTACATGGGTAGATGGGTTTTTGTACACCCACTAAAGGGGTCTATGATAGTGTGACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCAGGTGAGTCCTTACAACCTCTCTCTTCTATTCAGCTTAAATAGATTTTACTGCATTTGTTGGGGGGGAAATGTGTGTATCTGAATTTCAGGTCATGAAGGACTAGGGACACCTTGGGAGTCAGAAAGGGTCATTGGGAGCCCTGGCTGACGCAGACAGACATCCTCAGCTCCCATACTTCATGGCCAGAGATTTATAGGGATCCTGGCCAGCATTGCCGCTAGGTCCCTCTCTTCTATGCTTTCTTTGTCCCTCACTGGCCTCCATCTGAGATCATCCTGGAGCCCTAGCCAAGGATCATTTATTGTCAGGGGTCTAATCATTGTTGTCACAATGTGCCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGGTGAGTCCTAACTTCTCCCATTCTAAATGCATGTTGGGGGGATTCTGGGCCTTCAGGACCAAGATTCTCTGCAAACGGGAATCAAGATTCAACCCCTTTGTCCCAAAGTTGAGACATGGGTCTGGGTCAGGGACTCTCTGCCTGCTGGTCTGTGGTGACATTAGAACTGAAGTATGATGAAGGATCTGCCAGAACTGAAGCTTGAAGTCTGAGGCAGAATCTTGTCCAGGGTCTATCGGACTCTTGTGAGAATTAGGGGCTGACAGTTGATGGTGACAATTTCAGGGTCAGTGACTGTCTGGTTTCTCTGAGGTGAGGCTGGAATATAGGTCACCTTGAAGACTAAAGAGGGGTCCAGGGGCTTCTGCACAGGCAGGGAACAGAATGTGGAACAATGACTTGAATGGTTGATTCTTGTGTGACACCAGGAATTGGCATAATGTCTGAGTTGCCCAGGGGTGATTCTAGTCAGACTCTGGGGTTTTTGTCGGGTATAGAGGAAAAATCCACTATTGTGATTACTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAGGTAAGAATGGCCTCTCCAGGTCTTTATTTTTAACCTTTGTTATGGAGTTTTCTGAGCATTGCAGACTAATCTTGGATATTTGTCCCTGAGGGAGCCGGCTGAGAGAAGTTGGGAAATAAACTGTCTAGGGATCTCAGAGCCTTTAGGACAGATTATCTCCACATCTTTGAAAAACTAAGAATCTGTGTGATGGTGTTGGTGGAGTCCCTGGATGATGGGATAGGGACTTTGGAGGCTCATTTGAAGAAGATGCTAAAACAATCCTATGGCTGGAGGGATAGTTGGGGCTACGCGTTTTTAACCCTAGAAAGATAGTCTGCGTAAAATTGACGCATGCATTCTTGAAATATTGCTCTCTCTTTCTAAATAGCGCGAATCCGTCGCTGTGCATTTAGGACATCTCAGTCGCCGCTTGGAGCTCCCGTGAGGCGTGCTTGTCAATGCGGTAAGTGTCACTGATTTTGAACTATAACGACCGCGTGAGTCAAAATGACGCATGATTATCTTTTACGTGACTTTTAAGATTTAACTCATACGATAATTATATTGTTATTTCATGTTCTACTTACGTGATAACTTATTATATATATATTTTCTTGTTATAGATATCGCTAGTGGATCCTGGTTCTTTCCGCCTCAGAAGGTACTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTAAATTTTTGGGAATTTATTGATTTGCATTTAAAAGGGAACTGCTGACAAAGATTCACTGGTAATAATTTGAACAAGTTGGAAAATACAGTCAACATTACTGAAACACTACTAAAATAATTCCAGGACAGAACAAAACTTCTTAGATGCTGTCTTTGATGTGAAAATTGACTGCTTCTTACTTTTCTAACACACGGTGGTATAATTAACAATATTCAATCACTTCTATTCTTTCCTGCATATATAAAAATTAAAATACCAATTAAAAAACTAATATATCTTCTCTTTATTTCTTACAGATATGAGTTCAATGTTTCACTCAATAGTGCTGTGGTTTAAGAGAATTTTTTCATTTACAAGTTAAACAACAATCCGCCCAAAGGGAACTGATAGTCTATAGGCTCATAGTGCAAATAAACAGTTTAGGAATGCAGCAACTGACATTTCTAAAGTACAAAACAGATAAAATTCTTAGAAGATACATGCAAAAAGCTCTACTAAGCAGATGGCCACAGAACTAGAACATTGATAATTTTACTGGCGATGTCAATAGGACTCCAGATGTTTCCAAACTCAACTTGAACTCTCATCTTAGGCTTTGTATTTTGCTTTTCCAGTTTCACTAATGACACAAACATGATTCAAATCCCTGAAGTATTCATTATAGTCAAGGGCATATCCTACAACAAACTTGTCTGGAATTTCAAATCCAACAAAGTCTGGCTTATATCCAACACTTCGTGGGGTCCTTTTCACCAGCAAGCTTGCGACCTTGACCATCTTTGGATTATACTGCCTGACCAAGGAAAGCAAAGTCTGCATTGTTTTGCCAGTGTCAATTATATCTTCCACAATCAAGACATTCTTTCCAGTTAAAGTTGAGAGATCATCTCCACCAATTACTTTTATGTCCCCTGTTGACTGGTCATTACAATAGCTCTTCAGTCTGATAAAATCTACAGTCATAGGAATGGATCTATCACTATTTCTATTCAGTGCTTTGATGTAATCCAGCAGGTCAGCAAAGAATTTATAGCCCCCCTTGAGCACACAGAGGGCTACAATGTGATGGCCTCCCATCTCCTTCATCACATCTCGAGCAAGACGTTCAGTCCTACAGAAATAAAATCAGGAATTTAATAGAAAGTTTCATACATTAAACTTTATAACAAACACCTCTTAGTCATTAAACTTCCACACCAACCTGGGCAATATAGTGAGACCCCATGCCTGCAAAAAAAAAAAAATTAGCCAGGCATGGTAGCATGTACCTGTAGTCCCAGCTACTTGAGAGGTGAGGTGGGAAAATCACTTTAGTGCAGGATGTTGAGGCTGGAGTGAACTGTGATTGTGCCACTGCACTCCAGCCTGGACAATAGAGCAAGACCTTGTCTCAAAAAAATGCATTAAAAATTTTTTTTAAATCTTCCACGTAACACATCCTTTGCCCTCATGTTTCATAAGGTAAAAAATTTGATACCTTCAAAAAAACCAAGCATACCACTATCATAATTTTTTTTAAATGCAAATAAAAACAAGATACCATTTTCACCTATCAGACTGGCAGGTTCTGATTAAATGAAATTTCTTGGATAATATACAATATTAAGAGAGACTGTAGAAACTGGGCCAGTGGCTCATGCCTGTAATCCCAGCACTTTGGGAGGCTGGGTAACATGGCGAACCCTGTTTCTACAAAATAAAAATATTAGCTGGGAGTGGTGGCGCACACCTATAGTCCCAGCTACTCAGGAGGCTGAGGTGGAAGGATCGCTTGAACCCAGGAGGTTGAGACTGCAGTGAACTGTGATCATTCTGCTGCACTGCACCCCAGCCTGGGCAACAGAGACCTTGTCTCAAAAAAAAAAAAAAAAGAGACAAATTGTGAAGAGAAAGGTACTCTCATATAACATCAGGAGTATAAAATGATTCAACTTCTTAGAGGAAAATTTGGCAATACCAAAATATTCAATAAACTCTTTCCCCTTGACCCAGAAATTCCACTTGAATAAAGCTGAACAAGTACCAAACATGTAAAAGAATGTTTCTTCTAGTACAGTCGGTAAGAACAAAATAGTGTCTATCAATAGTGGACTGGTTAAATCAGTTATGGTATCTCCATAAGACAGAATGCTATGCAACCTTTAAAATATATTAGATAGCTCTAGACAGTGGATCCCCTCGAGGGACCTAATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTATATTAAGGGTTATTGAATATGTCGACTAGACACACTAATATTAAAAGTGTCCAATAACATTTAAAACTATACTCATACGTTAAAATATAAATGTATATATGTACTTTTGCATATAGTATACATGCATAGCCAGTGCTTGAGAAGAAATGTGTACAGAAGGCTGAAAGGAGAGAACTTTAGTCTTCTTGTTTATGGCCTCCATAGTTAGAATATTTTATAACACAAATATTTTGATATTATAATTTTAAAATAAAAACACAGAATAGCCAGACATACAATGCAAGCATTCAATACCAGGTAAGGTTTTTCACTGTAATTGACTTAACAGAAAATTTTCAAGCTAGATGTGCATAATAATAAAAATCTGACCTTGCCTTCATGTGATTCAGCCCCAGTCCATTACCCTGTTTAGGACTGAGAAATGCAAGACTCTGGCTAGAGTTCCTTCTTCCATCTCCCTTCAATGTTTACTTTGTTCTGGTCCCTACAGAGTCCCACTATACCACAACTGATACTAAGTAATTAGTAAGGCCCTCCTCTTTTATTTTTAATAAAGAAGATTTTAGAAAGCATCAGTTATTTAATAAGTTGGCCTAGTTTATGTTCAAATAGCAAGTACTCAGAACAGCTGCTGATGTTTGAAATTAACACAAGAAAAAGTAAAAAACCTCATTTTAAGATCTTACTTACCTGTCCATAATTAGTCCATGGGGAATAAACACCCTTTCCAAATCCTCAGCATAATGATTAGGTATGCAAAATAAATCAAGGTCATAACCTGGTTCATCATCACTAATCACGACGCCAGGGCTGCGGGTCGCCATAACGGAGCCGGCCGGCGCGCGGGCTGAATAACTTCGTATAATGTGTACTATACGAAGTTATTTGTTCAGGAGGAGGAAGCCGGTGGCGGAGCAGAGGAGGAGGCGGAGGCGCAGCAAGACCCCCCCCCCCCTGCAGGTCGAAAGGCCCGGAGATGAGGAAGAGGAGAACAGCGCGGCAGACGTGCGCTTTTGAAGCGTGCAGAATGCCGGGCCTCCGGAGGACCTTCGGGCGCCCGCCCCGCCCCTGAGCCCGCCCCTGAGCCCGCCCCCGGACCCACCCCTTCCCAGCCTCTGAGCCCAGAAAGCGAAGGAGCCAAAGCTGCTATTGGCCGCTGCCCCAAAGGCCTACCCGCTTCCATTGCTCAGCGGTGCTGTCCATCTGCACGAGACTAGTGAGACGTGCTACTTCCATTTGTCACGTCCTGCACGACGCGAGCTGCGGGGCGGGGGGGAACTTCCTGACTAGGGGAGGAGTAGAAGGTGGCGCGAAGGGGCCACCAAAGAACGGAGCCGGTTGGCGCCTACCGGTGGATGTGGAATGTGTGCGAGGCCAGAGGCCACTTGTGTAGCGCCAAGTGCCCAGCGGGGCTGCTAAAGCGCATGCTCCAGACTGCCTTGGGAAAAGCGCCTCCCCTACCCGGTAGATATCTATAACAAGAAAATATATATATAATAAGTTATCACGTAAGTAGAACATGAAATAACAATATAATTATCGTATGAGTTAAATCTTAAAAGTCACGTAAAAGATAATCATGCGTCATTTTGACTCACGCGGTCGTTATAGTTCAAAATCAGTGACACTTACCGCATTGACAAGCACGCCTCACGGGAGCTCCAAGCGGCGACTGAGATGTCCTAAATGCACAGCGACGGATTCGCGCTATTTAGAAAGAGAGAGCAATATTTCAAGAATGCATGCGTCAATTTTACGCAGACTATCTTTCTAGGGTTAAAAGAATTCGTAGTTGGAGATTTTCAGTTTTTAGAATAAAAGTATTAGCTGCGGAATATACTTCAGGACCACCTCTGTGACAGCATTTATACAGTATCCGATGCATAGGGACAAAGAGTGGAGTGGGGCACTTTCTTTAGATTTGTGAGGAATGTTCCACACTAGATTGTTTAAAACTTCATTTGTTGGAAGGAGAGCTGTCTTAGTGATTGAGTCAAGGGAGAAAGGCATCTAGCCTCGGTCTCAAAAGGGTAGTTGCTGTCTAGAGAGGTCTGGTGGAGCCTGCAAAAGTCCAGCTTTCAAAGGAACACAGAAGTATGTGTATGGAATATTAGAAGATGTTGCTTTTACTCTTAAGTTGGTTCCTAGGAAAAATAGTTAAATACTGTGACTTTAAAATGTGAGAGGGTTTTCAAGTACTCATTTTTTTAAATGTCCAAAATTTTTGTCAATCAATTTGAGGTCTTGTTTGTGTAGAACTGACATTACTTAAAGTTTAACCGAGGAATGGGAGTGAGGCTCTCTCATACCCTATTCAGAACTGACTTTTAACAATAATAAATTAAGTTTAAAATATTTTTAAATGAATTGAGCAATGTTGAGTTGGAGTCAAGATGGCCGATCAGAACCAGAACACCTGCAGCAGCTGGCAGGAAGCAGGTCATGTGGCAAGGCTATTTGGGGAAGGGAAAATAAAACCACTAGGTAAACTTGTAGCTGTGGTTTGAAGAAGTGGTTTTGAAACACTCTGTCCAGCCCCACCAAACCGAAAGTCCAGGCTGAGCAAAACACCACCTGGGTAATTTGCATTTCTAAAATAAGTTGAGGATTCAGCCGAAACTGGAGAGGTCCTCTTTTAACTTATTGAGTTCAACCTTTTAATTTTAGCTTGAGTAGTTCTAGTTTCCCCAAACTTAAGTTTATCGACTTCTAAAATGTATTTAGAATTCATTTTCAAAATTAGGTTATGTAAGAAATTGAAGGACTTTAGTGTCTTTAATTTCTAATATATTTAGAAAACTTCTTAAAATTACTCTATTATTCTTCCCTCTGATTATTGGTCTCCATTCAATTCTTTTCCAATACCCGAAGCATTTACAGTGACTTTGTTCATGATCTTTTTTAGTTGTTTGTTTTGCCTTACTATTAAGACTTTGACATTCTGGTCAAAACGGCTTCACAAATCTTTTTCAAGACCACTTTCTGAGTATTCATTTTAGGAGAAATACTTTTTTTTTAAATGAATGCAATTATCTAGACTTATTTCGGTTGAACATGCTGGTTGGTGGTTGAGAGGACACTCAGTCAGTCAGTGGCGTGAAGGGCTTCTAAGCCAGTCCACATGCTCTGTGTGAACTCCCTCTGGCCCTGCTTATTGTTGAATGGGCCAAAGGTCTGAGACCAGGCTGCTGCTGGGTAGGCCTGGACTTTGGGTCTCCCACCCAGACCTGGGAATGTATGGTTGTGGCTTCTGCCACCCATCCACCTGGCTGCTCATGGACCAGCCAGCCTCGGTGGCTTTGAAGGAACAATTCCACACAAAGACTCTGGACCTCTCCGAAACCAGGCACCGCAAATGGTAAGCCAGAGGCAGCCACAGCTGTGGCTGCTGCTCTTAAAGCTTGTAAACTGTTTCTGCTTAAGAGGGACTGAGTCTTCAGTCATTGCTTTAGGGGGAGAAAGAGACATTTGTGTGTCTTTTGAGTACCGTTGTCTGGGTCACTCACATTTAACTTTCCTTGAAAAACTAGTAAAAGAAAAATGTTGCCTGTTAACCAATAATCATAGAGCTCATGGTATTTTGAGGAAATCTTAGAAAACGTGTATACAATTGTCTGGAATTATTTCAGTTAAGTGTATTAGTTGAGGTACTGATGCTGTCTCTACTTCAGTTATACATGTGGGTTTGAATTTTGAATCTATTCTGGCTCTTCTTAAGCAGAAAATTTAGATAAAATGGATACCTCAGTGGTTTTTAATGGTGGGTTTAATATAGAAGGAATTTAAATTGGAAGCTAATTTAGAATCAGTAAGGAGGGACCCAGGCTAAGAAGGCAATCCTGGGATTCTGGAAGAAAAGATGTTTTTAGTTTTTATAGAAAACACTACTACATTCTTGATCTACAACTCAATGTGGTTTAATGAATTTGAAGTTGCCAGTAAATGTACTTCCTGGTTGTTAAAGAATGGTATCAAAGGACAGTGCTTAGATCCAAGGTGAGTGTGAGAGGACAGGGGCTGGGGTATGGATACGCAGAAGGAAGGCCACAGCTGTACAGAATTGAGAAAGAATAGAGACCTGCAGTTGAGGCCAGCAGGTCGGCTGGACTAACTCTCCAGCCACAGTAATGACCCAGACAGAGAAGGCCAGACTCATAAAGCTTTATCGATACCGTCGACCTCGAGGGGGGGCCCGGTACCTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATACACTCCGCTATCGCTACGTGACTGGGTCATGGCTGCGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGGCAGCTGCGGTAAAGCTCATCAGCGTGGTCGTGAAGCGATTCACAGATGTCTGCCTGTTCATCCGCGTCCAGCTCGTTGAGTTTCTCCAGAAGCGTTAATGTCTGGCTTCTGATAAAGCGGGCCATGTTAAGGGCGGTTTTTTCCTGTTTGGTCACTGATGCCTCCGTGTAAGGGGGATTTCTGTTCATGGGGGTAATGATACCGATGAAACGAGAGAGGATGCTCACGATACGGGTTACTGATGATGAACATGCCCGGTTACTGGAACGTTGTGAGGGTAAACAACTGGCGGTATGGATGCGGCGGGACCAGAGAAAAATCACTCAGGGTCAATGCCAGCGCTTCGTTAATACAGATGTAGGTGTTCCACAGGGTAGCCAGCAGCATCCTGCGATGCAGATCCGGAACATAATGGTGCAGGGCGCTGACTTCCGCGTTTCCAGACTTTACGAAACACGGAAACCGAAGACCATTCATGTTGTTGCTCAGGTCGCAGACGTTTTGCAGCAGCAGTCGCTTCACGTTCGCTCGCGTATCGSEQIDN0:4小鼠129转换

分离7个获得的克隆并进一步分析。预期的重组事件和所得结构在图33中示出。基于来自实施例3所述的R21实验的数据,当转染的群体在含有puro的培养基中选择时,预期严格选择出正确的克隆。这是因为puro-编码区需要启动子元件,且这优先由重组后的着陆区提供。因此,如诊断性PCR确定,这7个分离的克隆的大多数已经正确插入基因组中着陆区。诊断正确插入的引物在图33中示出。如果在引物"A"与"X"之间扩增610-bp片段并且在引物"Y"和"B"之间扩增478-bp片段,则在基因组中存在正确连接(图33和34)。注意在"A"与"1"引物及"2"与"B"引物之间有扩增的片段表示存在亲代基因组(即只有着陆区)。来自亲代细胞的这些结果内部存在于puro选择下的细胞集落中,其由于集落的几何形状而逃避选择。在将所述集落通过含有puro的培养基传代后,这些亲代连接片段消失表示所述亲代细胞从该群中除去。此外,正如预期,如果HPRT基因通过正确插入事件失活,所有克隆均示出是6-TG抗性的。

6.如果需要,重复插入一部分人类V(D)JDNA和除去载体DNA的步骤,以产生具有足以能与宿主恒定区联合产生嵌合抗体的全部或部分人类VDJ或VJ区的细胞,

一方面,本发明的方法特别包括:




公司地址:吉林省长春市长江路银座B座B10/13F
联系人:李文伟 13545603608
周海冰 13903264764
电话:15328941366 传真:6bo0rbvp@gmail.com
邮箱:k3118lz3p@hotmail.com

粤公网安备 44030702001579号

恒峰娱乐手机在线登录版登录@