基于基因靶向使用布新洛尔的治疗方法

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基于基因靶向使用布新洛尔的治疗方法

时间:2019-11-26本站浏览次数:268

       

基于基因靶向使用布新洛尔的治疗方法

本发明涉及应用评估布新洛尔治疗患者、尤其是心力衰竭患者的方法的用途。它涉及基于患者β1-肾上腺素能受体(AR)中Arg 389多态性是否纯合来确定是否向患者施用或处方布新洛尔的方法。

19.根据项17的方法,其中患者被确定在0AR蛋白质中389位处具有精氨酸。

可以通过涉及在塑料微离心管中使50mg样本再水化;沉淀;在10%甲醛溶液中重悬浮4小时进行固定;清洗/沉淀;重悬浮在温的2.5%琼脂中;沉淀;在冰水中使其冷却以使琼脂变硬;从管中移去组织/琼脂块;过滤和/或在石蜡中包埋块;和/或连续切割高达50个永久切片的相似方法来制备永久切片。

在边际非劣效性为1.16的情况下,这提供美托洛尔CR/XL超过安慰剂的治疗作用有36%保留,被认为对于证明功效来说是不够充分的,于是提出另一种设计。1.14的UCL将以90%的几率保留美托洛尔CR/XL超过安慰剂的治疗作用的50%,这被认为是可以接受的。因此,图28所示的设计已经被调整从而以90%几率实现该目标(图29)。已经通过将样本大小从1300增加到1600、并且在较小程度上通过使布新洛尔和美托洛尔CR/XL之间的随机化从2:1转变为I:1的方式实现了需要降低UCL的统计学几率增加。同样,在对因素反馈(agencyfeedback)的反应中,我们已经加入了另一个次要终点,在IB1ISgArg/Arg患者中布新洛尔对美托洛尔CR/XL。基于25%的预期作用大小,对于该次要终点的几率估计是71%,然而基于27%的预期作用大小,对另一个次要终点的几率估计是88%。因为在0ilSgArg/Arg群体中关于美托洛尔CR/XL的数据有限,所以25%的前者作用大小是很难估计的;仅有的可用数据显示与安慰剂相比美托洛尔CR/XL的治疗作用有很小或没有增强(Whiteetal.,2003)。对于另一个次要终点的27%的作用大小是基于上述讨论的美国MERIT-HF数据。

图14.慢性心肌0:肾上腺素能刺激的对立结果。

应用a-肌球蛋白重链启动子,利用具有定向心室表达人0lAR(Arg389或Gly389形式)的转基因小鼠来确定对长期施用(6-阻断剂普萘洛尔的等位基因特异性反应。两种受体的表达水平是等同的。最近已经将产生这种小鼠和它们的部分表征在别处详细报道(Perezetal.,2003)。对于当前研宄,用存在于饮用水中的普萘洛尔(0.5mg/ml)、或不含普萘洛尔的水(对照)连续处理3月龄的两种基因型小鼠、以及非转基因小鼠6个月。随后切除心脏并制备心室蛋白质提取物。对这些提取物进行Western印迹以应用先前描述的方法(Perezetal.,2003)确定以下蛋白质的表达:Gas、Gai2、G-蛋白偶联受体激酶-2(GRK2)、5型腺苷酰环化酶(AC5)、总受磷蛋白(phospholamban)(T-PLN)、磷酸化受磷蛋白(P-PLN)和肌浆内质网钙ATPase-2A(SERCA)。通过用ANOVA在基因型内比较未处理小鼠和普萘洛尔处理小鼠中蛋白质的表达来评估治疗作用。该研宄由辛辛那提大学动物实验管理委员会(theUniversityofCincinnatiAnimalUseandCareCommittee)批准。

b)或者给所述个体开布新洛尔治疗处方,其中患者的基因型是^1AR蛋白质的Arg389纯合体;或者不给所述个体开布新洛尔处方,其中患者的基因型不是0AR蛋白质的Arg389纯合体。

其他类抗心律失常剂的非限制性实例包括阿糖腺苷(adenocard)、地高平(Ianoxin)、乙酰卡尼、西萝芙木碱、克冠吗啉、茚丙胺、溴苯乙胺、丁萘酰胺、克冠异丁胺、卡波酸、西苯唑啉、丙吡胺、二氢奎尼丁、英地卡胺、异丙托溴胺、利多卡因、芬拉明、氯卡尼、美澳冰定、莫雷西嗪、吡美诺、普拉马林、普罗帕酮、必利诺宁、奎尼丁聚半乳糖醛酸盐、硫酸奎尼丁和奎尼辛。

根据最近的报道(Perezetal.,2003),具有心脏定向表达M_Gly389或M-Arg389的转基因小鼠显示出在表达某些心脏信号和Ca++操作蛋白(handlingprotein)方面随时间(早在6月龄时观察)有多种改变。为评估对长期0-阻断的基因型特异性反应的潜能,用安慰剂或0_阻断剂普萘洛尔处理表达每种MAR基因型的3月龄小鼠六个月,移除心室并制备蛋白质提取物。利用Western印迹定量指定蛋白质的表达,比较MAR基因型组内由处理引起的表达变化。如图4显示,普萘洛尔处理对来自Gly389小鼠的心脏中指定蛋白质的表达没有影响(P=0.67)。相反,在来自普萘洛尔处理的Arg389小鼠的心脏中观察到总体治疗反应(在表达上或者增加或者降低)(P<〇.002)。由(6-阻断引起的这些趋势的方向,包括增加Gas、P-PLN和T-PLN和降低Gai和GRK2,都被认为是在心脏肥大/心力衰竭背景下的恢复性生化反应(Liggett,2001)。随后,结合起来看,在这种转基因小鼠模型中与长期阻断相关的蛋白质表达谱提示,与具有01-Gly389基因型的心力衰竭患者相比,可以预期在M-Arg389心力衰竭患者中对0-阻断剂布新洛尔更有利的反应。




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