包含合成佐剂的疫苗组合物

当前位置:首页恒峰国际官网首页 >

恒峰国际官网首页

包含合成佐剂的疫苗组合物

时间:2020-01-12本站浏览次数:155

       

包含合成佐剂的疫苗组合物

本发明基于以基本上均一形态提供的合成吡喃葡萄糖脂佐剂(GLA)的有益免疫学佐剂特性的发现,公开了用于诱导或增强免疫反应的包括疫苗和药物组合物在内的组合物和方法。化学定义的合成GLA提供了包含天然产物佐剂、不同批次之间一致的疫苗组分,没有污染物或活性的波动。也提供了疫苗和药物组合物,其包括GLA以及抗原、钟样受体(TLR)激动剂、辅佐剂和诸如药物载体的载体中的一种或多种。

在某些其它相关的实施方案中,真菌选自曲霉菌(AspergiIlus)、芽生菌(Blastomyces)、球抱菌(Coccidioides)和肺抱子菌(Pneumocystis)。在某些其它相关的实施方案中,所述真菌是酵母,其在某些另外相关的实施方案是假丝酵母(Candida),其中仍在某些另外的实施方案中,假丝酵母选自白色念珠菌(C.albicans)、光滑念珠菌(C.glabrata)、克柔念珠菌(C.kruseii)、葡萄牙念珠菌(C.Iusitaniae)、热带念珠菌(C.tropicalis)、近平滑念珠菌(C.parapsiIosis)。

实施例4

本实施例描述了表明GLA的佐剂作用的体外模型。采用标准的组织培养方法学和试剂。按照供应商的建议,维持鼠J774和RAW267.4巨噬细胞系的细胞(AmericanTypeCultureCoIIection,Manassas,VA),并将其在多孔器皿中以粘附的细胞单层培养。遵循Xiongetal·(J·Biol.Chem2004,279,ppl0776-83)的实验方案,树突状细胞源自骨髓祖细胞。通过在细胞培养基(含有10%胎牛血清的DMEM)中稀释水性佐剂制剂获得合成GLA(AvantiPolarLipids,Inc.,Alabaster,AL;产品号699800)的多种佐剂浓度,并在收集无细胞培养物上清前,将细胞在含有5%C02的湿润空气中于37°C维持24小时。使用特异性的夹心€]^测定试剂盒(细胞因子试剂盒来自613;[08(^1^8,531101680,04,趋化因子试剂盒来自R&DSystems,Minneapolis,MN),按照生产商的说明书,测定上清液中诸如IL-12、IL-6和TNF的可溶性鼠细胞因子,以及诸如RANTES的趋化因子。

在另一个实施方案中,提供了治疗或预防个体自身免疫疾病的方法,所述个体具有或疑似有患自身免疫疾病的危险,所述方法包括给予个体包含(a)至少一种重组表达构建体和(b)吡喃葡萄糖脂佐剂(GLA)的疫苗组合物,所述构建体包含可操作连接于编码抗原的核酸序列的启动子,其中所述抗原来自与自身免疫疾病相关的至少一种抗原决定部位、生物分子、细胞或组织,或者与其在免疫学上交叉反应,并由此治疗或预防自身免疫疾病。在另外的实施方案中,所述重组表达构建体存在于病毒载体,该构建体在某些另外实施方案中存在于选自腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒、慢病毒、痘病毒和逆转录酶病毒的病毒中。在上述与治疗或预防自身免疫疾病相关的某些实施方案中,所述自身免疫疾病选自1型糖尿病、风湿性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、重症肌无力、克罗恩氏病(Crohn'sdisease)、甲状腺机能充进、血小板减少性紫癜和天疱疹。在上述与治疗或预防自身免疫疾病相关的的某些其它实施方案中,与自身免疫疾病相关的抗原决定部位、生物分子、细胞或组织选自snRNP(当所述自身免疫疾病是系统性红斑狼疮时),甲状腺球蛋白、促甲状腺素受体和甲状腺上皮细胞中的至少一种(当所述自身免疫疾病是甲状腺机能亢进时),血小板(当所述自身免疫疾病是血小板减少性紫癜时),天疱疹抗原、桥粒芯糖蛋白-3、桥粒斑蛋白、包斑蛋白和大疱性类天疱疮抗原1中的至少一种(当所述自身免疫疾病是天疱疹时),髓磷脂碱性蛋白(当所述自身免疫疾病是多发性硬化时),胰岛β细胞(当所述自身免疫疾病是1型糖尿病时)以及乙酰胆碱受体(当所述自身免疫疾病是重症肌无力时)。

依照本文公开的某些实施方案,GLA疫苗组合物可以含有至少一种重组表达构建体,其包含可操作连接于编码抗原的核酸序列的启动子。在某些另外的实施方案中,所述重组表达构建体存在于诸如腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒、慢病毒、痘病毒或逆转录酶病毒载体的病毒载体中。制备和使用这些表达构建体和载体的组合物和方法是本领域已知的,例如依照Ausubeletal.(Eds.),CurrentProtocolsinMolecularBiology(新编分子生物学实验指南),2006JohnWiley&Sons,NY,用于本文提供的多肽抗原的表达。通常可以在例如美国专利第6,844,192;7,037,712;7,052,904;7,001,770;6,106,824;5,693,531;6,613,892;6,875,610;7,067,310;6,218,186;6,783,981;7,052,904;6,783,981;6,734,172;6,713,068;5,795,577和6,770,445号以及别处找到用于某些本发明公开的实施方案中的重组表达构建体的非限定性实例,以及适用于本文提供的多肽抗原表达的教导。

在3周时间内,用单独的或配制于含有GLA(GLA-SE)、GLA+CpG(CpG1826,ColeyPharmaceuticals,25yg)(GLA/CpG-SE)或GLA+嘎德莫特(GDQ)(Invivogen,20yg)(GLA/GDQ-SE)的稳定乳剂中的ID83抗原(每次免疫每只动物给予8yg)免疫小鼠(每组三只C57BL/6动物)三次。最后一次注射后3周,处死小鼠并收集脾脏,依照发表的方法,通过ICS和流式细胞术分析CD4+和CD8+T细胞依赖性的IFN-γ、IL-2和TNF细胞因子对体外ID83抗原刺激的应答。IFN-γ、IL-2和TNF细胞因子的表达与抗肺结核分支杆菌感染的保护性THl反应有关。图7显示了ICS数据,表明了进行第三次免疫后一周在小鼠体内诱导的产生ID83特异性的IFN-γ、IL-2和TNF细胞因子的CD4+和CD8+T细胞的频数,所述免疫是使用单独的ID83或由含有GLA(GLA-SE)、GLA+CpG(GLA/CpG-SE)或GLA+GDQ(GLA/GDQ-SE)的制剂辅佐的ID83进行的。

在特别的实施方案中,本发明的药物或疫苗组合物包含小于0.2um的稳定水悬浮液,且进一步包含选自磷脂、脂肪酸、表面活性剂、去垢剂、阜苷、含氟脂(fIuorodatedlipids)等的至少一种组分。

图3显示了ELISA数据,表明了使用两种不同剂量的与GLA-AF或GLA-SE配制的Fluzone疫苗每次免疫后一周(即,在第7天,图A;以及在第28天,图B),与单独使用Fluzone相比,在小鼠体内诱导的抗Fluzone抗体产生的水平。显示了每组/时间点中的倒数终点滴度的平均值和标准误。图3的图C显示了HAI数据,表明了使用两种不同剂量的与GLA-AF或GLA-SE配制的Fluzone疫苗进行第二次免疫后一周,与单独使用Fluzone相比,在小鼠体内诱导的病毒中和抗体产生的水平。显示了每组/时间点中的倒数终点滴度的平均值和标准误。

实施例8

因此根据这些和相关的公开内容,已知检测人类疟疾感染的诊断方法,以鉴定具有或疑似有患疟疾传染性病原体感染的危险的个体。具体地,例如,将血液样本与含有3-乙酰基嘧啶腺嘌呤二核苷酸(APAD)、底物(例如,乳酸盐或乳酸)以及缓冲液合并。该试剂被设计为检测由疟疾寄生虫产生的独特的糖分解酶的存在。已知该酶是寄生虫乳酸脱氢酶(PLDH)。使用上述试剂,很容易区别PLDH与宿主的LDH。所述试剂与寄生虫感染的血液样本合并导致了APAD的还原。但是APAD不被宿主LDH还原。然后可以通过多种技术,包括光谱、荧光测定、电泳或比色分析来检测还原的APAD。以上述方式检测还原的APAD提供了疟疾感染的阳性指示(例如美国专利5,124,141)。在另一种诊断疟疾的方法学中,包含特征性氨基酸序列的多肽源自恶性疟原虫抗原GLURP,并可在检测样本中被针对所述多肽或与其反应的特异性抗体所识别。(美国专利5,231,168)




公司地址:吉林省长春市长江路银座B座B10/13F
联系人:李文伟 13545603608
周海冰 13903264764
电话:15328941366 传真:6bo0rbvp@gmail.com
邮箱:k3118lz3p@hotmail.com

粤公网安备 44030702001579号

恒峰娱乐手机在线登录版登录@